Substitution von Formamid durch Natriumhydroxid und Ethanol bei der Denaturierung von DNA zur Vorbereitung für die Fluoreszenz-in-situ-Hybridisierung (FISH).

Nummer

076-DE

Abschnitt

General Section

Anwendung

Sektor

Gesundheitswesen
Wissenschaftliche Forschung und Entwicklung

Funktion

Sonstige

Prozess

Sonstiges

Produktkategorie

Laborchemikalien

Verwendung

Fluoreszenz-in-situ-hybridisierung (FISH)

Kurzfassung

Formamid wird verwendet, um DNA für die Fluoreszenz-in-situ-Hybridisierung (FISH) zu denaturieren. Die Aufgabe des Formamid ist es, die in der Probe enthaltene DNA in die Einzelstränge zu trennen, so dass eine Gensonde an einen Strang binden kann. Die FISH-Technik wird verwendet, um das Vorhandensein oder Fehlen bestimmter DNA-Sequenzen in Chromosomen zu lokalisieren. In den letzten 15 Jahren hat die Uniklinik Sahlgrenska die 70%-ige Formamidlösung durch 30ml einer 1,9%-igen Natriumhydroxidlösung und 70ml absolutem Ethanol (99,5%) substituiert.

Die Substitution funktioniert gut, und die Angestellten haben keine bestimmten Einschränkungen durch die Alternative festgestellt.

Substituierte Stoffe

Formamide

CAS-Nr. 75-12-7 EC-Nr. 200-842-0 Index-Nr. 616-052-00-8

Chemische Gruppe

Carbonsäureamide

Einstufung: H-Sätze

H360D May damage the unborn child

Alternative Stoffe

Sodium hydroxide

CAS-Nr. 1310-73-2 EC-Nr. 215-185-5 Index-Nr. 011-002-00-6

Chemische Gruppe

Natriumverbindungen; Hydroxide

Einstufung: H-Sätze

H314 Causes severe skin burns and eye damage

Ethanol

CAS-Nr. 64-17-5 EC-Nr. 200-578-6 Index-Nr. 603-002-00-5

Chemische Gruppe

Alkohol

Einstufung: H-Sätze

H225 Highly flammable liquid and vapour

Andere negative Auswirkungen

Der Stoff ist: ein 1 Karzinogen (IARC); wie der Datenbank der nach SUBSPORT-Kriterien gefährlichen Stoffe zu entnehmen ist.

Verlässlichkeit der Informationen

Beleg der Umsetzung: es ist belegt, dass die Lösung zur Zeit der Veröffentlichung umgesetzt und in Benutzung war

Grund für die Substitution

CMR

Gefahrstoffbeurteilung

Für die Alternative gelten die R-Sätze 35, Verursacht schwere Verätzungen und 11, leicht entflammbar, während Formamid das Kind im Mutterleib schädigen kann.

Beschreibung der Substitution

Formamid wurde vorher für die Fluoreszenz-in-situ-Hybridisierung (FISH) verwendet, eine Technik, die angewendet wird, um das Vorhandensein oder Fehlen bestimmter Sequenzen in der DNA zu lokalisieren. Die Technik beinhaltet die Trennung der zwei DNA?Stränge, so dass eine eigens hierfür entwickelte Gensonde Zugang zu einem der Stränge erhält und an die gewünschte DNA- Sequenz binden kann. Formamid war vorher die Chemikalie der Wahl um die DNA Stränge voneider zu trennen.

Seit 15 Jahren hat die Abteilung für klinische Genetik des Universitätsklinikums Sahlgrenska Formamid mit Natriumhydroxid und Ethanol in allen FISH-Prozessen substitutiert.

Die verwendete Methode für den Wechsel von Formamid zu Natriumhydroxid und Ethanol ist die folgende: Die FISH-Gläser werden mit einer frisch angesetzten Lösung aus 30ml  1,9% Natriumhydroxid und 70ml absolutem Ethanol (99,5%) für 6 min denaturiert. Die FISH-Gläser werden dann unter Verwendung derselben Lösung, nur diesmal eiskalt, dehydratisiert. Der Dehydrationsprozess wird durchgeführt, indem die Ethanolkonzentration in der Natriumhydroxid/Ethanol Mischung für jeden Schritt erhöht wird. Nach dem Schritt mit der 70% Ethanol enthaltenden Lösung folgen noch zwei weitere Schritte, der erste mit 90% Ethanol und der letzte mit 100% Ethanol.

Der Vorteil der Substitution ist, dass das Labor kein Formamid mehr verwenden muss, das in vielerlei Hinsicht gefährlich ist und Beschränkungen unterliegt. Das Personal der Abteilung hat bisher keine bestimmten Nachteile der Substitution feststellen können.

Bewertung des Falls/der Substitution

Formamid kann das ungeborene Kind im Mutterleib schädigen und ist aus gesundheitlicher Sicht der Arbeitnehmer keine angemessene Lösung. Die Alternativen sind zu bevorzugen, müssen aber auf Grund ihrer Entflammbarkeit und ihrer ätzenden Wirkung mit Vorsicht verwendet werden.

Stand der Umsetzung

Vollauslastung

Unternehmen, das die Alternative anwendet

Abteilung für klinische Genetik, Universitätsklinik Sahlgrenska. http://www.biomedicine.gu.se/ominst/avd/genetik (auf Schwedisch)

Verfügbarkeit der Alternative

Leicht erhältlich.

Art der Informationsquelle

Verwender
Forschung

Kontakt

Umweltkoordinator der Abteilung für klinische Genetik, Universität Sahlgrenska

Datum der Überprüfung

27. Februar 2020